Salmonella sample Klinik

PEMERIKSAAN SALMONELLA DI LABORATORIUM

Salmonella merupakan salah satu  bakteri   penyebab utama dari penyakit yang disebarkan melalui makanan (foodborne diseases). Umumnya, serotipe Salmonella menyebabkan penyakit pada organ pencernaan, terjadinya diare merupakan ciri orang yang mengalami salmonellosis, keram perut, dan demam dalam waktu 8-72 jam setelah memakan makanan yang terkontaminasi oleh Salmonella.Gejala lainnya adalah demam, sakit kepala, mual dan muntah-muntah

S. enterica adalah S. typhi, S. typhimurium, dan S. enteritidis merupakan tiga serotipe utama dari jenis. S. typhi menyebabkan penyakit demam tifus (Typhoid fever), karena invasi bakteri ke dalam pembuluh darah dan gastroenteritis, yang disebabkan oleh keracunan makanan/intoksikasi. Gejala demam tifus meliputi demam, mual-mual, muntah dan kematian.

S. typhi memiliki keunikan hanya menyerang manusia, dan tidak ada inang lain. JIka meninfeksi bayi, balita, ibu hamil dan kandungannya serta orang lanjut usia dapat berakibat fatal karena kekebalan tubuh mereka  menurun.

Mencuci tangan dan menjaga kebersihan makanan yang dikonsumsi dapat mencegah kontaminasi Salmonella

Salmonella adalah suatu genus bakteri enterobakteria gram-negatif berbentuk tongkat yang menyebabkan tifus, paratifus, dan penyakit foodborne.

Spesies-spesies Salmonella dapat bergerak bebas dan menghasilkan hidrogen sulfida ( H₂S ). Salmonella dinamai dari Daniel Edward Salmon, ahli patologi Amerika, walaupun sebenarnya, rekannya Theobald Smith (yang terkenal akan hasilnya pada anafilaksis) yang pertama kali menemukan bakterium tahun 1885 pada tubuh babi.

Cara Pemeriksaan Salmonella dilaboratorium dapat diambil bahan pemeriksaan dari :

Darah, Urine, Faeces.

Alat - alat yang diperlukan  sebagai berikut

-        Inkubator  37⁰ C                                          

-        Kawat ose dan jarum tusuk                         

-         Bunsen

-         Pinset

-          Rak tabung reaksi

-          Objek gelas

-           Media penyubur / Selenit/ Larutan Empedu ( Gaal )

-          Agar Mac Conkey                                    

-          SS agar  (Agar Salmonella Shigella)

-          Media Uji bio Kimia L I M  ( lysin indol motil ), TSIA ( triple sugar iron agar )

-          Reagen Kovacks

-          Anti serum spesifik Salmonella dan Shigella

-          NaCl  0, 85 %

Tahap pengerjaan

1.Pembiakan Langsung  (Direct)

-          Sediakan perbenihan agar Mac Conkey dan SS agar diberi tanda

-          Tanam bahan pemeriksaan dengan cara menggoreskan 2 –3 ose bahan pada agar Mac Conkey dan SS agar, penggoresan secara isolasi.

-          Eramkan pada suhu 37⁰ C selama 24 jam.

-        Untuk bahan yang berasal dari darah masukkan kedalam media penyubur ( lar empedu inkubasi 24 jam pada suhu 37⁰ c.kemudian diisolasi SS agar).

2.Pembiakan melalui Media Penyubur (Indirect)

-          Sediakan media penyubur selenit dan MKT steril.

-          Tanam kira – kira 1 gram atau 1 – 2 ml faeces atau sediaan urine ke dalam media selenit dan MKT. 

-          Eramkan 37⁰ C selama 12 – 16 jam.

        

 3.Skema pengerjaan

	Bahan  pemeriksaan: faeces, urine (sedimen setelah diputar 3000 rpm selama 30 menit), Darah
		Biakan tidak langsung
Biakan langsung		Selenit, MKT, Lar Empedu
SS agar,  Mac Conkey
		370 C selama 12-16 jam
37o C  1 malam		Tanam pada SS agar                 ( 37o C  1 malam)
3 – 4 koloni tersangka masing – masing tanam pada TSIA & LIM		3 – 4 koloni tersangka masing-masing tanam pada TSIA & LIM
		37o C  1 malam
		UJi  serologi dengan anti serum:
		- Salmonella
		- Shigella

Catatan : untuk pemeriksaan Salmonella dari darah bila hari pertama setelah pengeraman tidak terdapat pertumbuham maka keesokan harinya di ulang isolasi sampai hari ke 7.

 3. Ciri – ciri Koloni Tersangka

-          Salmonella pada SS agar: tidak berwarna, jernih transparan, diameter koloni ± 2 mm,  pada bagian tengah koloni berwarna hitam (adalah ciri koloni S. paratyphi B, C, dan E).

-          Salmonella pada Mac Conkey agar: tidak berwarna, jernih transparan, diameter koloni  ± 3 mm.

-          Shigella pada SS agar dan Mac Conkey: tidak berwarna, jernih transparan, diameter koloni 1,5 – 2 mm.           

4. Interpretasi Reaksi pada TSIA dan LIM

T S I A				L I M			Tersangka
Bag. Lereng	Bag. dasar	Gas	H2S	Lysine	Indol	Gerak
merah	kuning	-	+/-	+	-	+	S. typhi
merah	kuning	+	-	-	-	+	S. paratyphi A
merah	kuning	+	++	+	-	+	S. paratyphi B, C & E
merah	kuning	-	-	-	+/-	-	Sh. flexner
merah	kuning	-	-	-	+/-	-	Sh. boydii
merah	kuning	-	-	-	-	-	Sh. sonnei
merah	kuning	-	-	-	+/-	-	Sh. dysentriae

Keterangan:

	H2S	Lysine	Indol	Gerak
Positif	endapan hitam pada bagian dasar agar	ungu	terbentuk cincin  merah	tumbuh dibagian atas
Negatif	tidak terdapat endapan hitam pada dasar agar.	kuning jernih	terbentuk cincin kuning	tumbuh sepanjang tusukan

5. Uji  Serologi

-                Siapkan objek gelas yang bersih.

-                Teteskan  anti serum  spesifik di atas objek gelas tersebut  dan  satu tetes NaCl   0, 85% disamping tetesan anti serum.

-                Ambil biakan bakteri pada TSIA dengan jarum tusuk,  suspensikan  pada NaCl  (sebagai kontrol ) dan sisanya suspensikan pada anti serum.

-                Goyang – goyang selama 0,5 -  1 menit.

-                Ciri positif terjadi reaksi agglutinasi (terbentuk gumpalan), sedangkan pada suspensi dengan NaCl hanya terbentuk suspensi homogen.

-                Kalau tidak terjadi agglutinasi pada isolasi yang pertama, biakan dibuat suspensi dengan NaCl 0,85 %, lalu dipanaskan dalam air mendidih selama 30 menit. Suspensi ini diputar 3000 rpm selama 15 menit. Endapan yang terjadi dites agglutinasi ulang.

1.      FSIS. 2006. foodborne illness and disease. [terhubung berkala] http://www.fsis.usda.gov/Fact_Sheets/Foodborne_Illness_&_Disease_Fact_Sheets/index.asp [11 Apr 2008].

2.      CDC. 2006. Division of Bacterial and Mycotic Diseases Salmonellosis.http://wwwn.cdc.gov/travel/contentDiseases.aspx#salm [11 Apr 2008].

3.      King S, Metzger WI. 1968. A new plating medium for the isolation of enteric pathogens. I. hektoen enteric agar. Appl Microbiol 16(4):577-578

4.      Taylor WI, Schelhart D. 1970. Isolation of Shigellae. 8. Comparison of xylose lysine deoxycholate agar, hektoen enteric agar, Salmonella-Shigella agar, and eosin methylene blue agar with stool specimens. Appl Microbiol 21:32-37.

5.      Ryan KJ, Ray CG (editors) (2004). Sherris Medical Microbiology (edisi ke-4th ed.). McGraw Hill. ISBN 0-8385-8529-9. 

6.      Giannella RA (1996). "Salmonella". di dalam Baron S et al (eds.). Baron's Medical Microbiology (edisi ke-4th ed.). Univ of Texas Medical Branch. ISBN 0-9631172-1-1. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi?rid=mmed.section.1929.

7.      Maloy S. 1999. Salmonella Information. [terhubung berkala]. http://www.Salmonella.org/info.html [11 Apr 2008].

1.       

PEMERIKSAAN LABORATORIUM NEISSERIA GONORRHOE

Pemeriksaan

Neisseria gonorrhoe

Tanpa disadari era globalisasi merambah pada pergaulan anak muda dari yang positif sampai pada yang merugikan, sehingga banyak anak yang baru belasan tahun sudah ada yang menderita penyakit kelamin menurut data dari sebuah laboratorium kesehatan penyakit kelamin tersebut disebabkan oleh kuman / bakteri Neisseria gonorrhoe ( N gonorrhoe ).

 Ditularkan melalui hubungan seksual atau menular dari ibu pengindap N gonorrhoe ke bayi yang dilahirkan sehingga bila bayi tertular kuman tersebut akan mengalami peradangan mata bila tidak diobati akan menyebabkan kebutaan.

            Gejala pada pada wanita hampir tak tampak biasanya menyerupai keputihan biasa kalau didiamkan akan menyebabkan infeksi panggul hingga menyebabkan kemandulan , pada pria sakit kencing, keluarnya cairan dari kemaluan, mengental hingga kencing nanah bercampur darah.

Kuman / bakteri ini tidak tahan berada diluar tubuh manuasia sehingga tidak menular lewat pemakaian handuk dan toilet bersama.

            Bila dilihat dibawah mikroskop merupakan sepasang bakteri berbentuk bulat /coccus ditengahnya ada lekukan seperti buah kopi atau seperti sepasang ginjal bila diwarnai memakai pewarnaan Gram akan terlihat berwarna merah, dilaboratorium kesehatan sering dikenal dengan istilah Gram negatif diplococcus.

            Bahan pemeriksaan berasal dari cairan vagina, cairan urethra, nanah/ pus dari mata, Hapus anus, dikirim kelaboratorium mikrobiologi dengan memakai media transfor biasanya Media Stuart atau media Amis pada media tersebut dalam suhu 2-8 derajat Celsius bisa tahan sampai 3 hari.

Bahan pemeriksaan tersebut ditanam/ diisolasi pada media agar coklat dari Thayer Martin dan agar darah sebagai control, diinkubasi pada temperatur  35-37 derajat Celsius dengan suasana CO² 3-5 %  selama 48 jam.

Pada  Agar coklat terdapat kumpulan bakteri/ koloni berwarna Putih  keabuan, licin, mengkilat, diambil satu koloni dan dilanjtkan uji biokimia pada media :

:

-                Glukosa cystine trypticase agar (Glukosa CTA),

-                 Maltosa cystine trypticase agar (Maltosa CTA),

-                Sakarosa cystine trypticase agar  (Sakarosa CTA).

Hasil uji biokimia dinyatakan positif apabila media berubah warna dari oranye menjadi kuning.

Jika tidak ada perubahan warna, berarti uji biokimia negatif.

Untuk ( N gonorrhoe ) pada Glukosa CTA terjadi perubahan warna oranye menjadi kuning, sedangkan Maltosa CTA dan Sakarosa CTA tidak berubah warna.

Ciri - ciri N. gonorrhoeae

GAMBARAN PREPARAT GRAM
- Dari bahan pemeriksaan langsung : Sebelum diwarnai dengan pewarnaan Gram setelah preparat kering difiksasi dengan methanol absolute selama 5 menit atau ethanol selama 20 menit.  Pada Mikroskop : Gram Negatif Diplococcus Ekstraseluler dan Intraseluler atau salah satu, bisa ekstrasel dan atau intrasel saja. - Dari koloni murni : Ketika disuspensikan dengan NaCl 0,85 % suspensi seperti larutan minyak. Pada mikroskop : Gram Negatif Diplococcus

Morfologi Koloni pada agar coklat	Agar coklat CO2 36 – 37o C	Agar darah 37 o C	Reaksi Bio Kimia
			Glukosa CTA	Maltosa CTA	Sakarosa CTA
Putih  keabuan, licin, mengkilat	+	-	+	-	-

Setelah didapat bakteri yang murni dari hasil isolasi diatas lakukan  uji ketahanan terhadap antibiotik sesuai permintaan dokter pengirim atau antibiotik yang telah menjadi bahan tes yang sudah biasa dilakukan dilaboratorium, uji ini berguna untuk menentukan pemberian obat pada penderita tersebut.

*Sumber

- GRADWOLHLS Vol 2 CLINICAL LAB.METHOD AND DIAGNOSTIK

- Data Laboratorium Bakteri 

- Dok Pribadi.